Таблица дозировки Follistatin-315, график и протокол ресуспензии
Таблица дозировки Follistatin-315 и график титрования
| Фаза | Доза на инъекцию | Единицы (на инъекцию) |
|---|---|---|
| Дни 1-7 — консервативный старт исследования | 100 мкг | 10 единиц (0.10 мл) |
| Недели 2-3 — обычный диапазон сообщества | 200 мкг | 20 единиц (0.20 мл) |
| Верхний предел — отчетный предел исследований | 300 мкг | 30 единиц (0.30 мл) |
Рекомендации по применению: См. рекомендации | 1 мл ресуспензии
Краткое руководство
Follistatin-315 (FS-315) — основной циркулирующий изоформа follistatin, гликопротеин, который связывает и нейтрализует миостатин (GDF-8) и активин A, освобождая тормоз Smad2/3 на рост скелетных мышц (PMID 20810712, PMID 19435857). Его кислотный C-концевой хвост сохраняет его растворимым в крови вместо связывания с поверхностями клеток, как у более короткого изоформы FS-288 (PMID 15472207). Путь follistatin подтвержден как мишень для мышц: генная терапия AAV1-FS344 улучшила расстояние ходьбы у пациентов с дистрофией Беккера (PMC4426808). Однако ни одно клиническое испытание не вводило рекомбинантный пептид follistatin, и молекула выводится из кровотока за несколько часов, поэтому нет клинически подтвержденной дозы для подкожного применения. Общее значение около 100-300 мкг/день не подтверждено. Follistatin-315 не одобрено FDA или EMA, запрещено WADA и продается только для исследовательских целей; модель дозирования здесь образовательная, а не медицинская рекомендация.
Ресуспензировать: Добавьте 1 мл бактерицидной воды → 1 мг/мл концентрация.
Типовая доза: 100-300 мкг/день SC (исследовательский только; нет клинической дозы)
Легкое измерение: На 1 мг/мл, 1 единица = 0.01 мл = 0.0100мг (10мкг)на шприце U-100 инсулина.
Хранение: Лиофилизированный порошок хранится замороженным при -20 °C и защищен от света; разведенное решение хранится в холодильнике при 2-8 °C и используется в течение примерно 2-4 недель. Избегайте многократных циклов замораживания и оттаивания, которые деградируют белок.
Период полураспада: Рекомбинантный FS-315 белок очищается примерно за несколько часов (почечная фильтрация, протеолиз, лиганд-индуцированная гепариновая очистка); только Fc-фьюзионные фоллистатины достигают суточной периода полураспада.
Путь: Человеческая терапия фоллистатина проводилась только внутримышечно с помощью AAV-генной трансфер; подкожное разведение здесь является образовательной исследовательской моделью, а не клиническим путем.
Статус: Не одобрено FDA или EMA; только для исследовательского использования; ингибиторы пути миостатина запрещены WADA. Образовательный контент, а не медицинская рекомендация.
Инструкция по ресуспензии и пошаговое смешивание
Лиофилизированный порошок должен быть правильно разведен. Агрегирование пептидных цепей может разрушить дисульфидные связи и сделать пептид биологически неактивным.
Наберите 1,0 мл бактерицидной воды в стерильный шприц (это даст раствор 1 мг/мл из флакона с 1 мг Follistatin-315 — 10 мкг на единицу шприца для инсулина).
Медленно введите воду вдоль внутренней стенки флакона; направьте поток воды от порошка и не распыляйте его на него, потому что фоллистатин — это хрупкий белок.
Гently помешивайте или покатывайте флакон — никогда не встряхивайте — до тех пор, пока раствор не станет полностью прозрачным; пена или сильное перемешивание может денатурировать белок и снизить активность.
Храните разведенный раствор в холодильнике при 2-8 °C и используйте в течение примерно 2-4 недель; наберите исследовательскую дозу по единицам (100 мкг = 10 единиц, 200 мкг = 20 единиц, 300 мкг = 30 единиц на шприце U-100).
Образовательное примечание: нет подтвержденной дозы инъекционного белка для фоллистина у человека — единственная терапия фоллистина у человека использовала передачу генов AAV, а не вводимый пептид; протрите место, введите подкожно и меняйте места, если следуете этой исследовательской моделью.
Интерактивный калькулятор шприца для Follistatin-315
В настоящее время визуализируется 1 мгфлакон, разведенный с 1мл бактерицидной воды. Настройте целевую дозу, чтобы динамически отобразить единицы шприца.
Расчет разведения: 1мг сухого порошка в 1мл воды дает 1,00мг/мл. Чтобы оценить дозу 250мкг, вытяните до 25,0единиц (25делений шприца).
Представление шприца U-100
Образовательный справочный визуал. Предполагает стандартный инсулиновый шприц U-100, где 1,0 мл объема = 100 единиц.
Планировщик количества исследовательских материалов
Научное математическое планирование шприцев, бактерицидной воды и сухих флаконов, необходимых для длительных исследовательских блоков с использованием 1 мгфлакона.
Виалы пептидов (Follistatin-315, 1 мг каждый):
- check8 недель при 100 мкг/день ≈ 6 флаконов (5600 мкг всего)
- check12 недель при 200 мкг/день ≈ 17 флаконов (16800 мкг всего)
- check16 недель при 300 мкг/день ≈ 34 флаконов (33600 мкг всего) — высокое количество флаконов объясняет, почему исследовательские циклы обычно проводятся только 10-30 дней, а не месяцы
Шприцы для инсулина (U-100):
- checkЕжедневное применение: 7 шприцов в неделю
- check8 недель ≈ 56 шприцов; 12 недель ≈ 84 шприцов; 16 недель ≈ 112 шприцов
- checkКаждая доза забирает только 10-30 единиц (100-300 мкг при 10 мкг/единица), что находится внутри одного шприца на 1 мл
Бактерицидная вода (бутылки по 30 мл): Используйте 1 мл на виалу с 1 мг для ресуспензии.
- check8 недель (~6 флаконов) ≈ 6 мл — меньше одной бутылки
- check12 недель (~17 флаконов) ≈ 17 мл — около одной бутылки
- check16 недель (~34 флаконов) ≈ 34 мл — 2 бутылки; разводите только то, что будет использовано в течение ~2-4 недель
Стерильные ватные тампоны:
- check1-2 тампонов на дозу (верхняя часть флакона + место инъекции)
- check8 недель ≈ 60-120 тампонов; 12 недель ≈ 90-170 тампонов
- check16 недель ≈ 120-230 тампонов; держите дополнительные для повторного протирания многоразовых флаконов
О Follistatin-315
Follistatin-315 (FS-315) — основной циркулирующий изоформа фоллистина, секретируемого гликопротеина, который связывает и нейтрализует миостатин и активин A, два лиганда семейства TGF-beta, которые тормозят рост скелетных мышц [1][2]. Поскольку его кислотный C-концевой хвост не позволяет ему связываться с гепаран-сульфатом на поверхности клетки, FS-315 остается в кровеносной системе вместо локализации в тканях, что делает его формой, наиболее связанной с системными, мышечными эффектами [3].\n\nВажное примечание о пути: нет клинически подтвержденной дозы инъекционного белка для фоллистина у человека. Единственная терапия фоллистина у человека до сих пор использовала передачу генов аденоассоциированного вируса (AAV1-FS344), доставляемого внутримышечно, а не вводимого рекомбинантного белка [7][8]. Ниже приведенные данные о подкожном разведении являются только образовательной исследовательской моделью, а не медицинским протоколом.\n\nВ исследованиях и сообществах обсуждаемая доза Follistatin-315 составляет примерно 100-300 мкг в день подкожно, обычно применяется в коротких циклах около 10-30 дней. Этот диапазон не имеет клинических испытаний. Эта инструкция моделирует 1-миллиграммовый флакон, разведенный с 1,0 мл бактерицидной воды (1 мг/мл, 10 мкг на единицу), поэтому 100 мкг измеряется как 10 единиц, 200 мкг измеряется как 20 единиц, а 300 мкг измеряется как 30 единиц на шприце U-100 инсулина.\n\nЧастота: Инъекция один раз в день подкожно. Follistatin-315 не одобрен FDA или EMA и представлен здесь исключительно в образовательных целях, а не как медицинская рекомендация.
Механизм действия (MOA)
Фоллистатин — это аутокринный/паракринный гликопротеин, состоящий из N-концевого домена и трех цистеиновых доменов фоллистатина (FSD1-3). Альтернативное спlicing гена FST приводит к образованию двух основных предшественников — FST317 и FST344; после удаления 29-аминокислотного сигнального пептида они зрелые в секретируемые белки FS-288 и FS-315 соответственно. FS-315 имеет приблизительно 27-аминокислотный кислый C-концевой участок, которого нет у более короткого FS-288. Этот хвост складывается обратно над базовым последовательностью связывания гепарина в FSD1, нейтрализуя его, поэтому FS-315 имеет низкое сродство к гепарансульфатным протеогликанам на поверхности клеток и циркулирует свободно, что делает его доминирующим изоформой фоллистатина, измеряемым в человеческой крови [2][3].\n\nФункционально фоллистатин является высокоспецифичным лигандным захватом для нескольких белков семейства TGF-β, особенно миостатина (GDF-8) и активина A, а также в меньшей степени GDF-11 и некоторых BMPs [1][2]. Два молекулы фоллистатина почти полностью обволакивают димер лиганда; кристаллическая структура комплекса активина: фоллистатина-315 (PDB 2P6A) показывает, что фоллистатин одновременно блокирует как эпитопы связывания рецептора типа I, так и типа II лиганда, поэтому захваченный миостатин или активин больше не может взаимодействовать с рецепторами активина типа II (ActRIIB/ActRIIA) [4][5]. Блокировка этого взаимодействия подавляет сигнальный каскад Smad2/3, который обычно подавляет миогенез, освобождая тормоз на накоплении мышечного белка и активности сателлитных клеток [1][6].\n\nФармакокинетика — это центральная проблема для любого инъекционного применения. Нативный и не-Fc рекомбинантный фоллистатин быстро выводится из циркуляции, примерно на несколько часов, из-за почечной фильтрации, протеолиза и, когда он связывается с лигандом, активин-индуцированного связывания гепарина, которое ускоряет выведение комплексов FS-315 [4]. Кислый хвост FS-315 и гликозилирование немного замедляют выведение по сравнению с FS-288, имеющим высокую способность связываться с гепарином, но белок все еще имеет короткое системное время пребывания; только инженеризированные Fc-фьюзионные фоллистатины достигают полувыведения на протяжении дня, и это разные молекулы. Следовательно, нет фармакокинетической основы для стандартизированной ежедневной подкожной дозы белка, и ни одна из них не была проверена на людях.\n\nВниз по потоку, блокирование миостатина/активина фоллистатином сильно анаболично в предклинических моделях: экспрессия или введение фоллистатина увеличивает массу мышц на треть и действует через пролиферацию сателлитных клеток и прямое подавление сигнала миостатина и активина [6]. Единственные данные на человека получены из генной терапии: клинический этап 1/2a испытания доставил AAV1-FS344 (кодирующий изоформу FS-315) путем инъекции в квадрицепсы пациентов с болезнью Беккера и сообщил о улучшенном расстоянии шести минут ходьбы и благоприятной мышечной гистологии, с длительным наблюдением, подтверждающим устойчивые преимущества ходьбы у ответчиков [7][8]. Эти результаты подтверждают путь фоллистатина как мишень для мышц, но не устанавливают безопасную дозу инъекционного белка, и фоллистатин-315 остается несогласованным исследовательским соединением.
Выдающиеся результаты клинических испытаний
- starЛи и коллеги (2010, Molecular Endocrinology) обобщили и расширили работы, показывающие, что фоллистатин — это мощный белок, связывающий миостатин и активин: трансгенные мышцы с повышенной экспрессией фоллистатина вызывают драматическую гипертрофию, а комбинация экспрессии фоллистатина с дефицитом гена миостатина увеличивает массу мышц в четыре раза — гораздо больше, чем просто дефицит миостатина — подразумевая, что активин и другие лиганты помимо миостатина участвуют в анаболическом эффекте фоллистатина [1].
- starСидис и коллеги (2006, Endocrinology) напрямую сравнили изоформы фоллистатина и фоллистатин-подобный-3, демонстрируя, что FS-288, FS-303 и FS-315 различаются в основном в связывании с поверхностью клеток (гепарансульфатом), а не в их основной способности нейтрализовать активин, миостатин и BMPs; слабое связывание FS-315 с поверхностью объясняет его роль как растворимого, циркулирующего антагониста [2].
- starШнейер и коллеги (2004, Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism) разработали иммуноанализ, специфичный для FS-315, и показали, что FS-315 — это основная изоформа фоллистатина в человеческой крови, в то время как она практически не определяется в яичниковой жидкости, подтверждая, что изоформа 315 — это системно циркулирующая форма, а клеточно-связанные изоформы FS-288/FS-303 локализуются в тканях [3].
- starЛерч, Шимасаки, Вудрафф и Джардецкий (2007, Journal of Biological Chemistry) решили структуру и биофизику связывания гепарина и активина с изоформами фоллистатина, показывая, что FS-315 ингибирует активин так же, как FS-288, но связывание активина может обнажить способность связывания гепарина в FS-315 — механизм, который может ускорять выведение комплексов FS-315:лиганда [4].
- starКристаллическая структура комплекса активина: фоллистатина-315 (RCSB PDB entry 2P6A) показывает, что две молекулы фоллистатина окружают димер активина и блокируют обе поверхности связывания рецепторов типа I и типа II, предоставляя структурную основу для антагонизма фоллистатина против сигнала активина и миостатина [5].
- starГилсон и коллеги (2009, American Journal of Physiology-Endocrinology and Metabolism) показали на мышах, что локальная экспрессия фоллистатина увеличивает массу мышц на 37%, эффект, ослабленный до 20% при блокировке пролиферации сателлитных клеток радиацией, демонстрируя, что гипертрофия, вызванная фоллистатином, зависит как от пролиферации сателлитных клеток, так и от совместного подавления миостатина и активина [6].
- starМендель и коллеги (2015, Molecular Therapy) провели клинические испытания 1/2a, доставляя AAV1-FS344 путем двусторонней инъекции в мышцы четырехугольной мышцы у шести пациентов с болезнью Беккера; у четырех из шести улучшилась дистанция ходьбы за шесть минут (прирост до 58-125 м) с уменьшением внутримышечной фиброза и большими волокнами на биопсии, без побочных эффектов, связанных с лечением, первый клинический опыт генной терапии, показавший функциональное улучшение в любом мышечном заболевании [7].
- starАль-Зайди и коллеги (2015, Journal of Neuromuscular Diseases) сообщили о продолжительном наблюдении за тем же когортой больных Беккера, найдя статистически значимое среднее улучшение на 11,5% дистанции ходьбы за шесть минут (p=0,02), сохраненное до 12 месяцев в группе с низкой дозой, с неотзывавшимися, которые имели обширный фиброз мышц на исходе [8].
Побочные эффекты и профиль переносимости
Клинические участники временно сообщают о легких побочных эффектах. Постепенное повышение дозы является наиболее эффективным вмешательством для ограничения побочных эффектов.
- warningНет данных о безопасности инъекционного фоллистатина у людей. Все утверждения о безопасности здесь основаны на данных животных или на клинических испытаниях генной терапии, использующих другой маршрут доставки, поэтому фактический профиль риска подкожного белка FS-315 действительно неизвестен [7][8].
- warningФоллистатин — это широкий захватчик лиганда, а не только блокатор миостатина — он также нейтрализует активин A, GDF-11 и несколько BMPs. Системное ингибирование активина/BMP может нарушать процессы, контролируемые этими лигандами, включая репродуктивную эндокринологию, воспаление и заживление ран, тонус сосудов и морфогенез кости [1][2].
- warningИзбыточное или продолжительное ингибирование миостатина/активина связано в моделях животных с изменениями сухожилий и соединительной ткани и несоответствием нагрузки мышц к сухожилиям, что вызывает теоретический риск травмы сухожилия или связки, поскольку сила мышц превышает адаптацию соединительной ткани.
- warningКак рекомбинантный гликопротеин, фоллистатин может вызывать реакции в месте инъекции и иммуногенность (анти-препарат антитела), которые могут вызывать местные или системные реакции и могут нейтрализовать активность; исследовательские материалы также несут риски воздействия эндотоксина или загрязнителей.
- warningСигнализация активина и фоллистатина участвует в пролиферации клеток и дисрегулируется в нескольких раках; хроническое изменение этого пути несет теоретические опасения относительно стимулирования опухолей, которые не были оценены для экзогенного FS-315.
- warningПоскольку белок FS-315 быстро выводится из организма, попытки поддерживать эффект за счет частых или высоких доз просто увеличивают общую экспозицию неизученному агенту без какого-либо подтвержденного терапевтического окна [4].
- warningВ клинических испытаниях генотерапии у людей не было зарегистрировано серьезных нежелательных явлений, связанных с лечением, но использовались мышечные векторы AAV в контролируемых дозах под медицинским наблюдением; это не подтверждает безопасность самопроизвольного подкожного введения белка [7][8].
- warningСтатус регулирования/исследований: Follistatin-315 не одобрен FDA или EMA ни для какого применения, не является пищевой добавкой, и ингибиторы пути миостатина запрещены в спорте WADA. Он продается только для лабораторных исследований, а эта страница предназначена для образовательных целей, а не для медицинских рекомендаций.
Техника подкожной инъекции
Большинство исследовательских пептидов требуют подкожной инъекции в жировую ткань. Никогда не вводите напрямую в кровеносный сосуд или глубокую мышечную ткань, если это не описано клинически.
1. Выбор места
Обычные места включения — живот (2 дюйма от пупка), наружная верхняя часть руки или бедра.
2. Дезинфекция
Тщательно очистите выбранную область, пробку и верхнюю часть флакона с помощью тампонов с 70% изопропиловым спиртом.
3. Угол и нажатие
Надавите на кожу и введите иглу под углом 45–90 градусов. Плавно нажмите на поршень.
4. Смена мест инъекций
Постоянно меняйте места инъекций, чтобы избежать липодистрофии или рубцов в тканях.
Часто задаваемые вопросы
Какова типичная доза Follistatin-315?expand_more
Не существует клинически установленной дозы Follistatin-315. Ни одно человеческое исследование не вводило рекомбинантный фоллистатин; единственная терапия фоллистатина у человека использовала передачу гена AAV1-FS344, а не белок. В исследованиях и обсуждениях сообщается приблизительно 100–300 мкг в день подкожно, обычно в коротких циклах около 10–30 дней, но этот диапазон не имеет клинической проверки и не имеет установленного безопасного предела. Расчет разведения на этой странице (1 мг флакона в 1,0 мл бактерицидной воды = 10 мкг на единицу инсулинового шприца) является образовательной справкой, а не рекомендацией.
Одобрен ли Follistatin-315 FDA?expand_more
Нет. Follistatin-315 не одобрен FDA или EMA ни для какого применения, и никакой продукт с рекомбинантным фоллистатином не лицензирован для использования у человека. Генотерапия фоллистатина изучалась только в ранних клинических испытаниях и остается экспериментальной. Ингибиторы пути миостатина также находятся в списке запрещенных WADA для спортсменов. Follistatin-315 продается исключительно для лабораторных исследований, а информация здесь образовательная, а не медицинская рекомендация.
Как развести Follistatin-315?expand_more
Для образовательной модели на этой странице наберите 1,0 мл бактерицидной воды в стерильный шприц и медленно введите ее вдоль внутренней стенки флакона с 1 мг Follistatin-315, направляя в сторону порошка. Аккуратно покрутите или потрясите — никогда не встряхивайте, потому что фоллистатин — это хрупкий белок, и пенообразование может денатурировать его. Результат — 1 мг/мл, или 10 мкг на единицу шприца U-100, поэтому 100 мкг — это 10 единиц, а 300 мкг — 30 единиц. Храните в холодильнике при температуре 2–8 °C и используйте в течение примерно 2–4 недель.
Какова период полураспада Follistatin-315?expand_more
Нативный и не-Fc рекомбинантный фоллистатин быстро выводится из крови — в течение нескольких часов — через почечную фильтрацию, протеолиз и связывание с гепарином, вызванное лигандом, которое ускоряет выведение комплексов FS-315. Кислый C-концевой хвост и гликозилирование замедляют выведение лишь немного по сравнению с изоформой FS-288, которая хорошо связывается с гепарином. Только инженерные фоллистатин-Fc фузии достигают суточных периодов полураспада, и эти молекулы отличаются. Это короткое время пребывания является одной из причин того, что нет подтвержденной ежедневной протокола дозирования белка.
Чем Follistatin-315 отличается от Follistatin-344, и можно ли его комбинировать?expand_more
Они описывают одну и ту же изоформу на разных этапах: FST344 — это сплайс-вариант/прецурсор, а после удаления его 29-аминокислотного сигнального пептида он становится зрелым, секретируемым белком из 315 остатков, FS-315. Исследовательские поставщики помечают флаконы как «Follistatin 344» или «Follistatin 315» в основном взаимозаменяемо. В практике сообщества фоллистатин иногда сочетают с гормонами роста или другими анаболиками, но нет контролируемой безопасности или эффективности для любого комплекта фоллистина, поэтому комбинации следует рассматривать как чисто экспериментальные.
Связанные руководства и инструменты
Пошаговые руководства по реформуляции, измерению и хранению Follistatin-315, а также универсальный калькулятор дозировки.
ЮРИДИЧЕСКОЕ ЗАЯВЛЕНИЕ:Только образовательные научные рекомендации. Лиофилизированные пептиды — это экспериментальные химические соединения и НЕ одобрены для употребления человеком, диагностики или терапии. Перед любым исследовательским применением проконсультируйтесь с лицензированным врачом.
Академические ссылки и цитирования исследований
Lee SJ, Lee YS, Zimmers TA, et al. Regulation of muscle mass by follistatin and activins. Mol Endocrinol. 2010;24(10):1998-2008. Просмотр научной статьи →
Sidis Y, Mukherjee A, Keutmann H, et al. Biological activity of follistatin isoforms and follistatin-like-3 is dependent on differential cell surface binding and specificity for activin, myostatin, and bone morphogenetic proteins. Endocrinology. 2006;147(7):3586-3597. Просмотр научной статьи →
Schneyer AL, Wang Q, Sidis Y, Sluss PM. Differential distribution of follistatin isoforms: application of a new FS315-specific immunoassay. J Clin Endocrinol Metab. 2004;89(10):5067-5075. Просмотр научной статьи →
Lerch TF, Shimasaki S, Woodruff TK, Jardetzky TS. Structural and biophysical coupling of heparin and activin binding to follistatin isoform functions. J Biol Chem. 2007;282(21):15930-15939. Просмотр научной статьи →
Структура комплекса Activin:Follistatin-315. RCSB Protein Data Bank, PDB ID 2P6A (2007). Просмотр научной статьи →
Gilson H, Schakman O, Kalista S, Lause P, Tsuchida K, Thissen JP. Follistatin induces muscle hypertrophy through satellite cell proliferation and inhibition of both myostatin and activin. Am J Physiol Endocrinol Metab. 2009;297(1):E157-E164. Просмотр научной статьи →
Mendell JR, Sahenk Z, Malik V, et al. A phase 1/2a follistatin gene therapy trial for becker muscular dystrophy. Mol Ther. 2015;23(1):192-201. Просмотр научной статьи →
Al-Zaidy SA, Sahenk Z, Rodino-Klapac LR, Kaspar B, Mendell JR. Follistatin gene therapy improves ambulation in Becker muscular dystrophy. J Neuromuscul Dis. 2015;2(3):185-192. Просмотр научной статьи →