Таблица дозировки Follistatin-344, график и протокол ресуспензии
Таблица дозировки Follistatin-344 и график титрования
| Фаза | Доза на инъекцию | Единицы (на инъекцию) |
|---|---|---|
| Начальный (низкая доза) | 100 мкг | 20 единиц (0.20 мл) |
| Стандартная исследовательская доза | 200 мкг | 40 единиц (0.40 мл) |
| Верхний предел сообщества | 300 мкг | 60 единиц (0.60 мл) |
Рекомендации по применению: См. рекомендации | 2 мл ресуспензии
Краткое руководство
Follistatin-344 (FS-344) — рекомбинантный гликопротеин фоллистатина, который нейтрализует миостатин (GDF-8) и активин A, два лиганда TGF-β, которые ограничивают рост скелетных мышц (PMID 9139826, PMID 11459935). Удаление этого тормоза снимает подавление пути Akt/mTOR и пролиферации клеток-спутников; у мышей фоллистатин может увеличить массу мышц в четыре раза (PMID 17726519), а AAV-доставленный FS344 обеспечил длительные приросты мышечной массы и силы у приматов и в ранних клинических испытаниях на людях (PMID 20368179, PMID 25322757, PMID 28279643). Критически важно, что в каждом исследовании эффективности использовалась генотерапия, вводимая непосредственно в мышцу, а не экзогенный пептид. Тем не менее, протоколы сообщества/исследований моделируют подкожную инъекцию примерно 100-200 мкг/день (до 300 мкг/день) в коротких циклах, что является обычной практикой без контролируемой проверки на людях. Follistatin-344 не одобрен FDA или EMA, запрещен WADA и продается только для лабораторных исследований. Данные о ресуспензии и дозировке здесь являются образовательной справочной информацией, а не медицинским советом.
Ресуспензировать: Добавьте 2 мл бактерицидной воды → 0.5 мг/мл концентрация.
Типичная доза: 100-200 мкг/день SC (исследование; до 300 мкг/день)
Легкое измерение: На 0.5 мг/мл, 1 единица = 0.01 мл = 0.0050мг (5мкг)на шприце U-100 для инсулина.
Хранение: Лиофилизированный порошок хранить замороженным при -20 °C и защищать от света; разведенное решение хранить в холодильнике при 2-8 °C и использовать в течение примерно 2-3 недель. Фоллистатин — это хрупкий белок, поэтому избегайте многократных циклов замораживания и размораживания, нагрева и сильного встряхивания.
Период полураспада: Короткая: экзогенный фоллистатин выводится через 30 минут до нескольких часов посредством связывания с гепарансульфатом на поверхности клетки и почечной экскреции; гликозилированный FST-315 сохраняется немного дольше. Фармакокинетика человека для введенного пептида не хорошо изучена.
Путь: Исследовательское сообщество моделирует подкожную инъекцию; единственная достоверно подтвержденная доставка у человека — это мышечная ААV-генная терапия. Биодоступность при пероральном применении пренебрежима (менее 5%).
Статус: Не одобрено FDA или EMA; только для исследовательского/образовательного использования; запрещено в спорте WADA как агент, влияющий на миостатин.
Инструкция по ресуспензии и пошаговое смешивание
Лиофилизированный порошок должен быть правильно реанимирован. Встряхивание цепей пептидов может разорвать дисульфидные связи и сделать пептид биологически неактивным.
Наберите 2 мл бактерицидной воды в стерильный шприц.
Медленно введите воду вдоль внутренней стенки флакона с 1 мг фоллистатина-344; не направляйте поток прямо на порошок, никогда не взбалтывайте, фоллистатин — хрупкий белок, который может денатурировать при встряхивании.
Аккуратно помешивайте или переворачивайте флакон до тех пор, пока раствор не станет полностью прозрачным; результат — концентрация 500 мкг/мл, или 5 мкг на единицу шприца для инсулина.
Храните в холодильнике при 2-8 °C и набирайте необходимые единицы на дозу (100 мкг = 20 единиц, 150 мкг = 30 единиц, 200 мкг = 40 единиц, 300 мкг = 60 единиц).
Образовательное примечание: единственная достоверно подтвержденная доставка фоллистина — это мышечная ААV-генная терапия в клинических испытаниях, поэтому эта схема подкожной реанимации — только справочное измерение; если моделировать подкожный путь, вводите медленно в подкожную ткань, чередуйте места и утилизируйте флакон после примерно 2-3 недель.
Интерактивный калькулятор шприца для Follistatin-344
В настоящее время визуализируется 1 мгфлакон, реанимированный 2мл бактерицидной воды. Настройте целевую дозу, чтобы динамически отображать единицы шприца.
Расчет реанимации: 1мг сухого порошка в 2мл воды дает 0,50 мг/мл. Чтобы оценить дозу 250мкг, вытяните до 50,0 единиц (50делений шприца).
Представление шприца U-100
Образовательный визуальный справочник. Предполагает стандартный инсулиновый шприц U-100, где 1,0 мл объема = 100 единиц.
Планировщик количества исследовательских материалов
Научное математическое планирование шприцев, бактерицидной воды и сухих флаконов, необходимых для длительных исследовательских блоков с использованием 1 мгфлакона.
Виалы пептидов (Follistatin-344, 1 мг каждый):
- checkПри дозе 100-200 мкг/день 1-миллиграммовый флакон прослужит примерно 5-10 дней, поэтому курс в 8 недель моделирует около 6-12 флаконов.
- checkКурс в 12 недель: примерно 9-17 флаконов при дозе 100-200 мкг/день.
- checkКурс в 16 недель: примерно 12-23 флаконов при дозе 100-200 мкг/день.
- checkНепрерывное ежедневное использование редко; большинство проводит краткосрочные циклы 2-4 недели, что значительно снижает эти цифры.
Шприцы для инсулина (U-100):
- checkОдин шприц 0,5 мл U-100 (29-31 G) на ежедневную подкожную инъекцию.
- check8 недель ≈ 56 шприцов; 12 недель ≈ 84; 16 недель ≈ 112 (округлить до коробок с 100 штуками).
- checkСохраняйте запасы, если дозировка разделена на двойные ежедневные инъекции.
- checkНикогда не используйте иглу повторно; используйте контейнер для острых предметов для утилизации.
Бактерицидная вода (бутылки по 30 мл): Используйте 2 мл на виалу для ресуспензии.
- checkКаждый флакон 1 мг требует 2 мл, поэтому один флакон на 30 мл реанимирует около 15 флаконов.
- checkКурс в 8 недель ≈ 1 бутылка; 12 недель ≈ 1-2 бутылки; 16 недель ≈ 1-2 бутылки.
- checkУтилизируйте каждый реанимированный флакон через примерно 2-3 недели независимо от оставшегося объема.
Стерильные спиртовые тампоны:
- checkИспользуйте два тампона на инъекцию: один для пробки флакона и один для места на коже.
- check8 недель ≈ 110+ тампонов; 12 недель ≈ 170+; 16 недель ≈ 220+.
- checkПокупайте в коробках на 200 штук и никогда не используйте тампон повторно.
- checkЧередуйте места инъекций (живот, бедро, верхняя часть руки), чтобы снизить раздражение.
О Follistatin-344
Follistatin-344 (FS-344) — это исследовательский рекомбинантный фоллистатин, гликопротеин, который нейтрализует миостатин (GDF-8) и активин A, чтобы снять репрессию роста скелетной мышцы [1][2]. "344" обозначает предшественник из 344 аминокислот; после удаления сигнального пептида образуется зрелый циркулирующий изоформ FST-315. Важно отметить, что единственный способ доставки фоллистина, который был подтвержден у человека, — это мышечная ААV-генная терапия в клинических испытаниях [6][7][8]; приведенные ниже данные по подкожным инъекциям — это образовательный ориентир по реанимации и измерению, а не клинически подтвержденный путь доставки, и дозировка отражает общепринятую практику сообщества/исследований, а не контролируемые данные у человека.\n\nЭто руководство моделирует 1-миллиграммовый флакон, реанимированный 2 мл бактерицидной воды, давая 500 мкг/мл, или 5 мкг на единицу шприца для инсулина, поэтому исследовательские дозы точно соответствуют шприцу U-100: 100 мкг = 20 единиц, 150 мкг = 30 единиц, 200 мкг = 40 единиц и 300 мкг = 60 единиц. Типичная доза Follistatin-344, обсуждаемая в научном сообществе, составляет 100-200 мкг в день, с некоторыми источниками, расширяющими до 300 мкг в день, почти всегда применяются в коротких циклах 2-4 недели, а не непрерывно.\n\nЧастота: Ежедневно подкожно (часто в коротких циклах), основано на коротком периоде полувыведения фоллистина. Follistatin-344 не одобрен FDA или EMA, запрещен WADA и представлен здесь исключительно в образовательных целях.
Механизм действия (MOA)
Фоллистатин — это гликопротеин, действующий как аутокринный/паракринный регулятор, который регулирует суперсемейство TGF-β. Обозначение «Фоллистатин-344» (FS-344) относится к предшественнику из 344 аминокислот, кодируемому одним из альтернативно сплайсированных транскриптов FST; после расщепления его сигнального пептида образуется зрелый изоформ FST-315, состоящий из 315 остатков, который является основной циркулирующей формой. Второй транскрипт производит более короткий изоформ FST-288, связанный с клеточной поверхностью. Все изоформы делят N-концевую область, три домена фоллистина и последовательность, связанную с гепарином, которая определяет, насколько плотно белок прикрепляется к гепарансульфатным протеогликанам клеточной поверхности [5].\n\nМеханически фоллистатин работает, удерживая лиганды, а не сигнализируя через собственный рецептор. Его основная мышечная цель — миостатин (GDF-8), отрицательный регулятор массы скелетных мышц; потеря миостатина в одиночку примерно удваивает мышечную массу у мышей [1]. Два молекулы фоллистина обволакивают димер миостатина и скрывают все четыре эпитопа связывания рецептора, предотвращая связывание миостатина с активинными типами II рецепторов (ActRIIA/ActRIIB) [2][5]. Поскольку активированный рецептор обычно фосфорилирует SMAD2/3 и ограничивает рост, нейтрализация миостатина освобождает путь синтеза белка Akt/mTOR и стимулирует пролиферацию спутниковых клеток. Критически, фоллистатин также связывает активин A, второй лиганд ActRII, который ограничивает мышечную массу независимо от миостатина; именно эта двойная блокада объясняет, почему увеличение экспрессии фоллистина добавляет мышечную массу сверх того, что достигается только удалением миостатина, до четырехкратного увеличения мышечной массы у мышей, и почему гетерозиготное снижение фоллистина уменьшает вес мышц [3][4].\n\nТрансляционные данные поступают из генной терапии, а не из введенного белка. ААV1-доставленный FS344 вызвал значительные, длительные (более 15 месяцев) увеличения размера и силы четырехглавой мышцы у макак без каких-либо аномалий органов или репродуктивных гормонов [6], а инъекции rAAV1.CMV.huFollistatin344 в мышцу улучшили расстояние шести минут ходьбы в ранних клинических испытаниях Becker-мышечной дистрофии и спорадического тельца включения миозита [7][8]. Проектирование FS-344 в FS-315 было выбрано специально, чтобы ограничить влияние на осевой фолликулостимулирующего гормона (FSH) гипофиза.\n\nФармакокинетика — основной недостаток модели вводимого пептида, используемой научным сообществом. Белок фоллистина имеет короткое системное время пребывания: в зависимости от изоформы и гликозилирования, экзогенный фоллистатин выводится за 30 минут до нескольких часов, потому что последовательность, связанная с гепарином, удерживает его на клеточных поверхностях, и он фильтруется почками. Оральная биодоступность почти нулевая (менее 5%) из-за протеолитического расщепления. Нет опубликованных контролируемых фармакокинетических или эффективностных исследований подкожно введенного фоллистина в человеческом организме, поэтому период полураспада, биодоступность и дозозависимость подкожного пути остаются плохо определенными [6][7][8]. Подкожные концентрации, указанные на этой странице, являются образовательной мерой, а не валидированной терапевтической схемой, и фоллистатин-344 остается только исследовательным соединением.
Выдающиеся результаты клинических испытаний
- starMcPherron, Lawler и Lee (1997, Nature) определили миостатин (GDF-8) как отрицательный регулятор массы мышц семейства TGF-β; мыши GDF-8 null были значительно больше, чем дикие типы, с весом отдельных мышц в два-три раза больше контроля, что установило целевой объект, который нейтрализует фоллистатин [1].
- starLee и McPherron (2001, PNAS) продемонстрировали, что белок фоллистина, связывающий активин, ингибирует связывание миостатина с рецептором типа II активина (ActRIIB) и предложили фоллистатин, процеин миостатина или связанные блокеры в качестве агентов для усиления роста мышц, основной причиной использования фоллистина как ингибитора миостатина [2].
- starLee (2007, PLoS One) показал, что трансген фоллистина в скелетных мышцах в сочетании с миостатином null вдвое увеличила массу мышц у мышей (вес мышц увеличился на ~250-350% по сравнению с диким типом), доказав, что фоллистатин увеличивает мышечную массу сверх потери миостатина, блокируя также сигналы активина [3].
- starLee и коллеги (2010, Molecular Endocrinology) подтвердили, что фоллистатин регулирует массу мышц, одновременно антагонизируя миостатин и активин A, и что гетерозиготное снижение фоллистина уменьшает вес мышц на 15-20%, подчеркивая механизм двойного лиганда [4].
- starCash и коллеги (2009, EMBO J) решили структуру миостатин: фоллистатин-288, показав, что две молекулы фоллистина обволакивают димер миостатина, блокируя все четыре сайта связывания рецептора, и что образование комплекса создает электроположительную поверхность, усиливающую связывание гепарина и ускоряющую выведение миостатина [5].
- starKota и коллеги (2009, Science Translational Medicine) ввели AAV1-FS344 в четырехглавую мышцу макак циномольгус и наблюдали значительное, долгосрочное увеличение размера и силы мышц, сохраняющееся более 15 месяцев, без аномальной морфологии органов, без негативной иммунной реакции и без влияния на репродуктивные гормоны [6].
- starMendell и коллеги (2015, Molecular Therapy) провели фаза 1/2a клиническое испытание генной терапии фоллистина (rAAV1.CMV.FS344) у шести пациентов с болезнью Беккера; терапия хорошо переносилась с нормальными профилями органов и гипофизарно-гонадных гормонов, и несколько пациентов улучшили расстояние шести минут ходьбы на 108-125 метров за год [7].
- starMendell и коллеги (2017, Molecular Therapy) лечили шесть пациентов с спорадическим тельцем включения миозита rAAV1.CMV.huFS344; у группы, получавшей лечение, медиана улучшения составила +56 метров в год на шести минутах ходьбы против −25,8 метров в год у необработанных контрольных (p = 0,01), с уменьшенной фиброзом и улучшенной регенерацией на биопсии, хотя все эффекты использовали внутримышечную доставку гена, а не введенный пептид [8].
Побочные эффекты и профиль переносимости
Клинические участники временно сообщают о слабых побочных эффектах. Постепенное повышение дозы является наиболее эффективным вмешательством для ограничения побочных эффектов.
- warningНе существует установленного профиля безопасности экзогенного подкожно введенного фоллистина у человека; все данные о человеке получены из внутримышечной генной терапии AAV, поэтому сообщения о введенном пептиде FS-344 являются анекдотическими и не подтвержденными, а дозозависимость и токсичность практически неизвестны [6][7][8].
- warningФоллистатин широкого спектра действия ингибирует активин и другие лиганды TGF-β, регулирующие осевой фолликулостимулирующий гормон (FSH) гипофиза, репродукцию, воспаление, заживление ран и тканевую гомеостаз; дизайн FS-344/FS-315 был специально выбран, чтобы ограничить участие гипофиза, и в клинических испытаниях не было зарегистрировано изменений гормонов, но системное ингибирование нерегулируемым материалом несет теоретический эндокринный и репродуктивный риск [6][7].
- warningБыстрый, значительный рост мышечной силы может превзойти адаптацию сухожилий, связок и соединительной ткани, повышая теоретический риск травмы или повреждения сухожилия; эффекты на сердечную мышцу от хронического ингибирования миостатина/активина не изучались у людей.
- warningСигнализация активина имеет роль опухолевого супрессора и регулятора роста в некоторых тканях, поэтому широкое, продолжительное ингибирование вызывает теоретическую онкологическую и тканевую проблему перероста, которая не была оценена для вводимого пептида.
- warningВозможны реакции в месте инъекции (боль, покраснение, синяк), а также риск инфекции или стерильности; это усугубляется тем, что исследования пептидов не производятся по фармацевтическим стандартам и могут различаться по чистоте, идентичности и содержанию эндотоксинов.
- warningБелок фоллистина хрупкий и неактивный при пероральном приеме (биодоступность менее 5%) и быстро выводится из кровотока; неправильное хранение, циклы замораживания и оттаивания или агрегация могут денатурировать его, и короткий период полураспада означает, что дозозависимость подкожного введения плохо определена.
- warningОнлайн-утверждения, связывающие высокие дозы фоллистина с конкретными вредами, такими как центральный серозный хориоретинит, широко распространены, но не подтверждаются рецензируемыми данными о людях; отсутствие документированных вредов отражает отсутствие контролируемого исследования, а не доказанную безопасность.
- warningРегуляторный/исследовательский статус: Follistatin-344 НЕ одобрен FDA или EMA ни для какого применения, не может законно продаваться как диетический добавка, запрещен в спорте WADA как агент, влияющий на миостатин, и продается только для лабораторных исследований; долгосрочная безопасность для человека неизвестна.
Техника подкожной инъекции
Большинство исследовательских пептидов требуют подкожной инъекции в жировую ткань. Не вводите непосредственно в кровеносный сосуд или глубокую мышечную ткань, если это не указано клинически.
1. Выбор места
Обычные места введения включают живот (2 дюйма от пупка), внешнюю верхнюю часть рук или бедра.
2. Дезинфекция
Тщательно очистите выбранную область, пробку и верхнюю часть флакона с помощью тампонов с 70% изопропиловым спиртом.
3. Угол и введение
Надавите на кожу и введите иглу под углом 45-90 градусов. Плавно нажмите на поршень.
4. Смена мест инъекций
Постоянно меняйте места введения, чтобы избежать липодистрофии или рубцов в тканях.
Часто задаваемые вопросы
Какой типичный доза Follistatin-344?expand_more
В исследованиях и протоколах сообщества наиболее часто упоминаемая доза Follistatin-344 составляет 100-200 мкг в день подкожно, некоторые источники указывают до 300 мкг в день, почти всегда применяется в коротких циклах (часто 2-4 недели, затем перерыв), а не непрерывно. Эти цифры получены из экспериментов на животных и генной терапии, а также из личного опыта, а не из контролируемых клинических испытаний с введенным пептидом follistatin, поэтому они должны рассматриваться как образовательная информация, а не как подтвержденная или рекомендованная доза.
Одобрен ли Follistatin-344 FDA?expand_more
Нет. Follistatin-344 не одобрен FDA или EMA ни для какого применения. Это не диетическая добавка и не может быть легально маркетинговой. Единственные изученные в клинических испытаниях человеческие препараты follistatin были экспериментальными продуктами AAV-генной терапии в ранних фазах испытаний при мышечной дистрофии и миозите, которые не являются одобренными лекарствами. Follistatin-344, продаваемый как пептид, является химическим веществом для исследований и также запрещен в спорте WADA как агент, влияющий на миостатин.
Как восстановить Follistatin-344?expand_more
Для флакона на 1 мг, представленного здесь, наберите 2 мл бактерицидной воды и медленно влейте ее по внутренней стенке флакона, затем аккуратно помешайте до тех пор, пока раствор не станет прозрачным. Никогда не встряхивайте, так как follistatin — это хрупкий белок. Это даст 500 мкг/мл, или 5 мкг на единицу инсулинового шприца, поэтому 100 мкг = 20 единиц, 150 мкг = 30 единиц, 200 мкг = 40 единиц и 300 мкг = 60 единиц. Храните в холодильнике при температуре 2-8 °C и используйте в течение примерно 2-3 недель.
Какова период полураспада Follistatin-344?expand_more
У follistatin-белка короткое время циркуляции. В зависимости от изоформы и гликозилирования, экзогенный follistatin выводится за 30 минут до нескольких часов, потому что его последовательность связывания с гепарином удерживает его на поверхности клеток и он также фильтруется почками; форма FS-288 на поверхности клеток выводится быстрее, тогда как гликозилированная FST-315 сохраняется немного дольше. Нет опубликованных контролируемых фармакокинетических исследований подкожного введения follistatin у людей, поэтому подкожное время полураспада не хорошо изучено.
Можно ли комбинировать Follistatin-344 с другими исследовательскими соединениями?expand_more
Некоторые в научном сообществе комбинируют follistatin с секретагогами ростового гормона или другими мышечными пептидами, но нет данных о безопасности, взаимодействии или эффективности таких комбинаций у людей, и сам follistatin никогда не был проверен как введенный пептид в контролируемых испытаниях. Комбинирование нерегулируемых исследовательских химикатов увеличивает неопределенности относительно чистоты, дозировки и побочных эффектов. Эта информация предназначена только для образовательных целей и не является рекомендацией по комбинированию соединений.
Связанные руководства и инструменты
Пошаговые ссылки по реconstитуции, измерению и хранению Фоллистатин-344, а также универсальный калькулятор дозировки.
МЕДИЦИНСКОЕ ОТКАЗОВАНИЕ:Образовательные научные руководства только. Лиофилизированные пептиды — экспериментальные химические соединения и НЕ одобрены для употребления человеком, диагностики или терапии. Проконсультируйтесь с лицензированным врачом перед любым исследовательским применением.
Академические ссылки и цитирования исследований
McPherron AC, Lawler AM, Lee SJ. Regulation of skeletal muscle mass in mice by a new TGF-beta superfamily member. Nature. 1997;387(6628):83-90. Просмотр научной статьи →
Lee SJ, McPherron AC. Regulation of myostatin activity and muscle growth. Proc Natl Acad Sci U S A. 2001;98(16):9306-9311. Просмотр научной статьи →
Lee SJ. Quadrupling muscle mass in mice by targeting TGF-β signaling pathways. PLoS One. 2007;2(8):e789. Просмотр научной статьи →
Lee SJ, Lee YS, Zimmers TA, et al. Regulation of muscle mass by follistatin and activins. Mol Endocrinol. 2010;24(10):1998-2008. Просмотр научной статьи →
Cash JN, Rejon CA, McPherron AC, Bernard DJ, Thompson TB. The structure of myostatin:follistatin 288: insights into receptor utilization and heparin binding. EMBO J. 2009;28(17):2662-2676. Просмотр научной статьи →
Kota J, Handy CR, Haidet AM, et al. Follistatin gene delivery enhances muscle growth and strength in nonhuman primates. Sci Transl Med. 2009;1(6):6ra15. Просмотр научной статьи →
Mendell JR, Sahenk Z, Malik V, et al. A phase 1/2a follistatin gene therapy trial for Becker muscular dystrophy. Mol Ther. 2015;23(1):192-201. Просмотр научной статьи →
Mendell JR, Sahenk Z, Al-Zaidy S, et al. Follistatin gene therapy for sporadic inclusion body myositis improves functional outcomes. Mol Ther. 2017;25(4):870-879. Просмотр научной статьи →
ClinicalTrials.gov. Clinical Intramuscular Gene Transfer of rAAV1.CMV.huFollistatin344 Trial to Patients With Duchenne Muscular Dystrophy. Identifier NCT02354781. Просмотр научной статьи →