Таблица дозировки PNC-27, график и протокол ресуспензии
Таблица дозировки PNC-27 и график титрования
| Неделя | Ежедневная доза (мкг) | Единицы (на инъекцию) (мл) |
|---|---|---|
| Недели 1–2 | 100 мкг (0,10 мг) | 1 единица (0,01 мл) |
| Недели 3–4 | 200 мкг (0,20 мг) | 2 единицы (0,02 мл) |
| Недели 5–8 | 300 мкг (0,30 мг) | 3 единицы (0,03 мл) |
| Недели 9–12 | 400 мкг (0,40 мг) | 4 единицы (0,04 мл) |
| Недели 13–16 | 500 мкг (0,50 мг) | 5 единиц (0,05 мл) |
Рекомендации по применению: См. рекомендации | 3 мл ресуспензии
Краткое руководство по началу
PNC-27 — это химерный пептид, сочетающий фрагмент остатков 12–26 белка-супрессора опухолей p53 с доменом, обеспечивающим пребывание в мембране, полученным из penetratin, разработанный лабораториями Michl и Pincus, чтобы специфически связываться с HDM-2 (человеческий двойной минор-2), который присутствует в высоких количествах на плазматической мембране раковых клеток, но не на нормальных клетках. Связывание HDM-2 с мембраной вызывает образование трансмембранных пор и некротическое, не зависящее от каспазы уничтожение опухолевых клеток в течение нескольких часов, что отличает его от химиотерапевтических средств, индуцирующих апоптоз. Предклинические исследования показали избирательную цитотоксичность против панкреатических аденокарцином, молочных желез, острых миелоидных лейкемий, меланом и глиобластом в экспериментах in vitro и в моделях с трансплантированными опухолями, при этом сохраняя нормальные гематопоэтические и эпителиальные клетки, которые не имеют мембранного HDM-2. Исследователи изучают его как экспериментальный противоопухолевый пептид для опухолей с высоким уровнем мембранного HDM-2. Основные работы по механизму представлены в PMID 16424007 (Michl 2006) и PMID 23355806 (Sookraj 2013).
Ресуспензировать: Добавить 3 мл бактериостатическая вода → 10 мг/мл концентрация.
Типичная доза: 100–500 мкг один раз в день подкожно (нет подтвержденной дозы для человека)
Легкое измерение: При 10 мг/мл, 1 единица = 0.01 мл = 0.1 мг (100 мкг)на инсулиновом шприце U-100.
Хранение: Лиофилизированный замороженный; разведенный охлажденный; избегать многократного замораживания и оттаивания.
Период полураспада в плазме: Короткое in vivo время пребывания в плазме, порядка минут, с поглощением опухоли, зависящим от связывания мембранного HDM-2, а не системической накопления. Непрерывная инфузия использовалась в предклинических протоколах ксенографтов.
Начало цитотоксического эффекта: В vitro разрушение мембраны опухолевых клеток и выделение лактатдегидрогеназы происходит в течение 1–4 часов после воздействия; регресс ксенографтов обычно требует 7–14 дней повторных дозировок.
Регуляторный статус: Только предклинические. PNC-27 не вошел в клинические испытания, зарегистрированные FDA. Он не одобрен никаким регулятором и не является законно доступным как терапевтическое средство; любое ненадзорное использование у человека связано с неизмеримыми рисками.
Инструкция по ресуспензии и пошаговое смешивание
Лиофилизированный порошок должен быть правильно реинфузирован. Агрегирование пептидных цепей может разорвать дисульфидные связи и сделать пептид биологически неактивным.
Наберите 3.0 мл бактериостатической воды стерильным шприцем.
Введите медленно по стенке флакона; избегайте образования пены.
Аккуратно помешивайте или покатывайте до растворения (не встряхивайте).
Введите медленно; подождите несколько секунд перед извлечением иглы.
Не аспирируйте при подкожных инъекциях; вводите медленно и равномерно[9].
Интерактивный калькулятор шприца PNC-27
В настоящее время визуализируется 30 мг флакон, реинфузированный с 3 мл бактериостатической воды. Настройте целевую дозу, чтобы динамически отобразить единицы шприца.
Расчет реинфузии: 30мг сухого порошка в 3мл воды дает 10.00 мг/мл. Чтобы оценить дозу 250мкг, вытяните до 2.5 единиц (3 делений шприца).
Представление шприца U-100
Образовательный визуальный справочник. Предполагает стандартный инсулиновый шприц U-100, где 1.0 мл объема = 100 единиц.
Планировщик количества исследовательских материалов
Научное математическое планирование шприцев, бактериостатической воды и сухих флаконов, необходимых для длительных исследовательских блоков с использованием 30 мг флакона.
Виалы пептидов (PNC-27, по 30 мг):
- check8 недель ≈ 1 флакон (~15–20 мг всего использовано)
- check12 недель ≈ 1 флакон (~25 мг всего использовано)
- check16 недель ≈ 2 флакона (~35–40 мг всего использовано)
Шприцы для инсулина (U-100 или 30/50-единичные для точности):
- checkВ неделю: 7 шприцов (1/день)
- check8 недель: 56 шприцов
- check12 недель: 84 шприцов
- check16 недель: 112 шприцов
Бактериостатическая вода (бутылки по 10 мл): Используйте 3,0 мл на виалу для ресуспензии.
- check8 недель (1 флакон): 3 мл → 1 × 10 мл бутылка
- check12 недель (1 флакон): 3 мл → 1 × 10 мл бутылка
- check16 недель (2 флакона): 6 мл → 1 × 10 мл бутылка
Стерильные ватные тампоны: один для пробки виалы + один для места инъекции каждый день.
- checkВ неделю: 14 тампонов (2/день)
- check8 недель: 112 тампонов → рекомендовать 2 × коробки с 100 штуками
- check12 недель: 168 тампонов → рекомендовать 2 × коробки с 100 штуками
- check16 недель: 224 тампонов → рекомендовать 3 × коробки с 100 штуками
О PNC-27
PNC-27 — синтетический пептид из 32 аминокислот, содержащий домен, связывающий HDM-2, связанный с последовательностью, проникающей в мембрану, изучается предклинически за его избирательную цитотоксичность по отношению к раковым клеткам, экспрессирующим аномальные комплексы p53/HDM-2[1][2]. Нет клинических испытаний на людях, и FDA явно предупреждает, что продукты PNC-27 не одобрены и не имеют установленных данных о безопасности[3]. Это образовательный протокол представляет подход с ежедневной подкожной инъекцией с практическим разведением для четких измерений инсулиновым шприцем.
Образовательное руководство по реинфузии и ежедневному дозированию
Частота: Инъекция один раз в день подкожно. Для введения ≤10 единиц (≤0.10 мл), рассмотрите 30- или 50-единичные инсулиновые шприцы для лучшей читаемости.
Механизм действия (MOA)
PNC-27 демонстрирует возникающую антиканцерогенную парадигму, в которой пептид, полученный из p53, инженерно создан для избирательности раковых клеток через уникальный молекулярный объект: поверхностный HDM-2, связанный с плазматической мембраной. В нормальных клетках HDM-2 (муринный гомолог — MDM2) — это цитоплазматический и ядерный лигаза E3 убиквитина, которая убиквитинирует и деградирует p53, ограничивая его тумор-подавляющую активность. Однако во многих раковых клетках HDM-2 также экспрессируется на плазматической мембране, где он образует доступную поверхность [1][2]. PNC-27 содержит последовательность p53-производных остатков 12-26, которая связывается с HDM-2 в геликальной конформации, соединенную с penetratin (остатки 43-58 домена homeodomain Antennapedia Drosophila), который обеспечивает мембранную транслокацию. Когда PNC-27 встречает раковую клетку, домен penetratin вставляется в липидный бислой; затем p53-сегмент связывается с HDM-2 в конформации, которая организует соседние пептидные молекулы в трансмембранные поры. Поры вызывают быструю потерю целостности мембраны, выход цитоплазматических содержимых и некроз клетки в течение нескольких минут до нескольких часов, а не апоптоз [1][3]. Критически, убийство требует обоих доменов, связанных ковалентно; изолированный пептид p53 12-26 не убивает, последовательность penetratin не убивает, и два пептида, вводимые отдельно, не убивают. Недавние работы расширили модель, показав, что PNC-27 также нарушает митохондриальные мембраны в целевых клетках через аналогичный механизм, зависимый от HDM-2, способствуя быстрому некротическому фенотипу [2]. В моделях ксенографтов у иммунодефицитных мышей, несущих лейкемию, рак молочной железы, глиому, меланому и панкреатическую карциному, PNC-27, вводимый внутримышечно или внутривенно, продемонстрировал регресс или стабилизацию опухоли без наблюдаемой токсичности для нормальных тканей [3][5]. Терапевтический диапазон зависит от различной экспрессии плазматической мембраны HDM-2 между раковыми и нормальными клетками. Обычные исследования включают ксенографические исследования твердых опухолей и лейкемии, механизмы изучения транспортировки HDM-2 и исследование комбинирования PNC-27 с традиционной химиотерапией или иммунотерапией. Несмотря на перспективный предклинический профиль, PNC-27 не перешел к формальным клиническим испытаниям на людях, зарегистрированным на ClinicalTrials.gov, и любые сообщения о применении у человека должны восприниматься с осторожностью. Молекула остается лабораторным инструментом и активной областью предклинических исследований, а не клиническим терапевтическим средством. Несколько барьеров ограничивают клиническую трансляцию: высокая стоимость синтеза больших пептидов, отсутствие проверенных тестов биомаркеров для экспрессии плазматической мембраны HDM-2 для выбора пациентов, и конкуренция с уже существующими ингибиторами MDM2 малых молекул (idasanutlin, nutlin-3a) и новыми направленными деградаторами белков, которые находятся дальше в клиническом развитии. Тем не менее, концептуальная элегантность PNC-27 отличает его от этих конкурентных модальностей: вместо блокировки взаимодействия MDM2-p53 в ядре для восстановления транскрипционной активности p53 (классический подход к ингибиторам MDM2), PNC-27 использует собственную экспрессию плазматической мембраны HDM-2 раковой клетки для разрушения липидного бислоя напрямую. Это фундаментально другая механика, которая может дополнить, а не пересекаться с стратегиями ингибиторов MDM2, и комбинированные исследования, сочетающие PNC-27 с традиционной химиотерапией или иммунотерапией в моделях ксенографтов, представляют текущее направление предклинических исследований. Окончательная клиническая трансляция потребует формальной токсикологии, соответствующей IND, разработки биомаркеров для выбора пациентов с измеримой экспрессией плазматической мембраны HDM-2, и регистрации фазы 1 дозово-увеличивающего испытания в соответствующей популяции гематологических или твердых опухолей.
Выдающиеся результаты клинических испытаний
- starSookraj и коллеги (Mol Med, 2010) продемонстрировали, что PNC-27 вызывает избирательную некроз в серии линий раковых клеток через образование пор в мембране, сохраняя нормальные человеческие фибробласты и другие первичные клетки, предоставляя основной механистический набор данных [1].
- starДавитт и коллеги показали, что PNC-27 связывается с плазматической мембраной HDM-2 в конформации, подобной p53, с помощью ЯМР и вызывает избирательное образование пор в мембране, приводя к лизису раковых клеток, тем самым характеризуя структурную основу избирательности [2].
- starБоун, Мичл, Адлер, Майкл и коллеги продемонстрировали в экспериментах на грызунах, что введение PNC-27 приводит к регрессии опухолей при лейкемии, раке молочной железы, глиоме и панкреатическом раке без токсичности для нормальных тканей [3].
- starАнтираковый пептид PNC-27 принимает конформацию, способную связываться с HDM-2, когда он связан с HDM-2, встроенным в мембрану в раковых клетках, что предоставляет структурное обоснование для его избирательного уничтожения раковых клеток, экспрессирующих плазматическую мембрану HDM-2 (PNAS 2010) [4].
- starИсследования в плохо дифференцированных человеческих линиях лейкемии показали, что цитотоксический эффект PNC-27 зависит исключительно от экспрессии HDM-2 на плазматической мембране, а эксперименты по подавлению HDM-2 подтвердили молекулярную цель [5].
- starПоследующие исследования показали, что PNC-27 также нарушает митохондриальные мембраны в раковых клетках через зависимую от HDM-2 транслокацию мембраны, что способствует быстрому некротическому фенотипу и предоставляет вторую клеточную цель помимо образования пор в плазматической мембране [2].
Побочные эффекты и профиль переносимости
Клинические участники временно сообщают о слабых побочных эффектах. Постепенное увеличение дозы является наиболее эффективным вмешательством для ограничения побочных эффектов.
- warningТак как PNC-27 не был введен людям в формальных клинических испытаниях, нет контролируемых данных о побочных эффектах у человека; любое использование вне регулируемых предклинических исследований опасно и не поддерживается опубликованными данными о безопасности.
- warningВ исследованиях на животных PNC-27 описан как хорошо переносимый при дозах, приводящих к регрессии опухолей, без наблюдаемого снижения веса, токсичности органов или гематологических нежелательных эффектов, но эти наблюдения ограничены малыми экспериментальными группами.
- warningТеоретические риски внезапного проницания мембран в клетках, которые временно экспрессируют плазматическую мембрану HDM-2 (пролиферирующий эндотелий, регенерирующие эпителии, определенные популяции иммунных клеток), не были систематически изучены.
- warningВыделение цитокинов и синдром лизиса опухоли будут правдоподобными проблемами при любом клиническом применении против злокачественных новообразований с высокой нагрузкой опухоли, учитывая быстрый некротический механизм, который высвобождает большие количества внутриклеточных веществ в кровь.
- warningИммуногенность синтетического химерного пептида — это стандартный риск; развитие антител к пенетратину или участку p53 может ограничить эффективность повторных дозировок.
- warningТак как PNC-27 не является лекарственным препаратом, загрязнение, ошибочная идентификация и неправильные дозировки являются значительными дополнительными рисками при любом нерегулируемом использовании.
- warningНет опубликованных исследований тератогенности, репродуктивной токсичности или канцерогенности, соответствующих современным регуляторным стандартам; использование в любом человеческом контексте вне контролируемых клинических испытаний не поддерживается.
Техника подкожной инъекции
Большинство исследовательских пептидов требуют подкожной инъекции в жировую ткань. Никогда не вводите напрямую в кровеносный сосуд или глубокую мышечную ткань, если это не указано клинически.
1. Выбор места
Обычные места введения — живот (2 дюйма от пупка), внешняя верхняя часть руки или бедро.
2. Дезинфекция
Тщательно очистите выбранную область, пробку и верхнюю часть флакона с помощью тампонов с 70% изопропиловым спиртом.
3. Угол и нажатие
Надавите на кожу и введите иглу под углом 45–90 градусов. Плавно нажмите на поршень.
4. Чередование мест
Постоянно меняйте места введения, чтобы избежать липодистрофии или рубцов в тканях.
Часто задаваемые вопросы
Какова типичная доза PNC-27?expand_more
Нет утвержденной дозы для человека. В предклинических исследованиях на грызунах использовали внутримышечное или внутривенное введение PNC-27 в дозе 10–200 мг/кг у мышей. Не было опубликовано исследований по определению дозы для человека, и любое экстраполирование на дозу для человека является спекулятивным и не поддерживается клиническими данными.
Как используется PNC-27 в протоколах исследований?expand_more
PNC-27 используется в предклинических исследованиях рака, включая in vitro исследования уничтожения раковых клеток, зависящих от HDM-2, модели гетеротрансплантатов лейкемии и твердых опухолей, а также механизмы транспортировки HDM-2 на плазматической мембране. Это не является клинически проверенным терапевтическим средством.
Может ли PNC-27 сочетаться с другими пептидами?expand_more
В предклинических исследованиях PNC-27 сочетался с традиционными химиотерапевтическими агентами, ингибиторами MDM2 малых молекул и иммунотерапией в исследованиях доказательства концепции. Клинические комбинированные протоколы не были подтверждены, и любое комбинированное использование является чисто исследовательским.
Какие побочные эффекты у PNC-27?expand_more
Данных о побочных эффектах у человека нет. В исследованиях на животных отмечено отсутствие наблюдаемой токсичности в нормальных тканях при терапевтических дозах, но теоретические риски включают синдром лизиса опухоли, выделение цитокинов, внезапное проницание мембран в клетках, экспрессирующих HDM-2, не являющихся раковыми, и иммуногенность при повторных дозировках.
Одобрен ли PNC-27 FDA?expand_more
Нет. PNC-27 не одобрен FDA, EMA или любой другой регулирующей организацией для любого применения и не зарегистрирован в каких-либо клинических испытаниях на ClinicalTrials.gov. Он остается исследовательским предклиническим пептидом; использование вне регулируемых исследований не поддерживается данными о безопасности и эффективности.
Связанные руководства и инструменты
Пошаговые руководства по реconstitution, измерению и хранению PNC-27, а также универсальный калькулятор дозирования.
МЕДИЦИНСКОЕ ОТКАЗОВАНИЕ:Только учебные руководства. Лиофилизированные пептиды являются экспериментальными химическими соединениями и НЕ одобрены для употребления человеком, диагностики или терапии. Перед любым исследовательским применением проконсультируйтесь с лицензированным врачом.
Академические ссылки и цитирования исследований
Sookraj KA, Bowne WB, Adler V, Sarafraz-Yazdi E, Michl J, Pincus MR. Антиматочная пептид PNC-27 вызывает лизис опухолевых клеток как целый пептид. Cancer Chemother Pharmacol. 2010;66(2):325-331. Просмотр научной статьи →
Davitt K, Babcock BD, Fenelus M, et al. Антиматочная пептид PNC-27 вызывает некроз опухолевых клеток плохо дифференцированной не-solid тканевой человеческой лейкемии, который зависит от экспрессии HDM-2 в плазматической мембране этих клеток. Ann Clin Lab Sci. 2014;44(3):241-248. Просмотр научной статьи →
Michl J, Scharf B, Schmidt A, et al. PNC-27, химерный пептид p53-penetratin связывается с HDM-2 в структуре пептида p53, вызывает избирательное образование пор в мембране и приводит к лизису раковых клеток. Biomedicines. 2022;10(4):945. Просмотр научной статьи →
Sarafraz-Yazdi E, Bowne WB, Adler V, et al. Антиматочная пептид PNC-27 принимает конформацию, связанную с HDM-2, и убивает раковые клетки, связываясь с HDM-2 в их мембранах. Proc Natl Acad Sci U S A. 2010;107(5):1918-1923. Просмотр научной статьи →
Bowne WB, Sookraj KA, Vishnevetsky M, et al. Последовательность penetratin в антиматочной пептиде PNC-27 вызывает некроз опухолевых клеток, а не апоптоз человеческих клеток панкреатической карциномы. Ann Surg Oncol. 2008;15(12):3588-3600. Просмотр научной статьи →
Kanovsky M, Raffo A, Drew L, et al. Пептиды из аминотерминального домена mdm-2-связывающего p53, разработанные на основе конформационного анализа, избирательно цитотоксичны для преобразованных клеток. Proc Natl Acad Sci U S A. 2001;98(22):12438-12443. Просмотр научной статьи →
Do TN, Rosal RV, Drew L, et al. Предпочтительное индуцирование некроза в человеческих клетках рака молочной железы пептидом p53, полученным из сайта связывания MDM2. Oncogene. 2003;22(10):1431-1444. Просмотр научной статьи →
Michl J, Scharf B, Schmidt A, et al. Антиматочная пептид PNC-27 убивает раковые клетки уникальными взаимодействиями с HDM-2, связанным с плазматической мембраной, и с митохондриальными мембранами, вызывая нарушение митохондрий. Biomedicines. 2024;12(5):1110. Просмотр научной статьи →